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RÈGLEMENT (CEE) No 2426/90 DE LA COMMISSION

du 21 août 1990

modifiant le règlement (CEE) no 1725/79 relatif aux modalités d'octroi des aides au lait écrémé transformé en aliments composés et au lait écrémé en poudre notamment destiné à l'alimentation des veaux

LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,

vu le traité instituant la Communauté économique européenne,

vu le règlement (CEE) no 804/68 du Conseil, du 27 juin 1968, portant organisation commune des marchés dans le secteur du lait et des produits laitiers (1), modifié en dernier lieu par le règlement (CEE) no 3879/89 (2), et notamment son article 10 paragraphe 3,

considérant que l'article 1er paragraphe 2 point a) du règlement (CEE) no 1725/79 de la Commission (3), modifié en dernier lieu par le règlement (CEE) no 3368/88 (4), établit que le lait écrémé en poudre doit satisfaire aux définitions données à l'article 1er du règlement (CEE) no 986/68 du Conseil (5), modifié en dernier lieu par le règlement (CEE) no 1115/89 (6), et qu'il doit être produit sans aucune adjonction;

considérant dès lors que l'addition frauduleuse de lactosérum sec au lait écrémé utilisé pour la production de poudre, ou à la poudre elle-même, est contraire aux dispositions susmentionnées; que, en l'absence d'une méthode communautaire officielle de détection de la poudre de lactosérum dans la poudre de lait écrémé qui peut contenir du babeurre en poudre, le règlement (CEE) no 1725/79 ne prévoit pas non plus de règles particulières concernant la détection de lactosérum présure sec; qu'une méthode d'analyse a récemment été établie pour la détection de lactosérum présure sec; qu'il convient d'imposer cette méthode dans le cadre du règlement susmentionné;

considérant que les mesures prévues au présent règlement sont conformes à l'avis du comité de gestion du lait et des produits laitiers,

A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:

Article premier

Le règlement (CEE) no 1725/79 est modifié comme suit:

1) À l'article 10 paragraphe 3, le premier alinéa est ainsi complété:

« Dans le cas où ces contrôles concernent le lait écrémé en poudre à utiliser en l'état ou sous forme de mélange, l'absence de poudre de lactosérum présure est établie par la procédure définie à l'annexe IV. »

2) À l'annexe I point A sous 2 lettre j), le texte est remplacé par le texte suivant:

« j) autres et notamment le lactosérum acide, dans la mesure où sa détection est exigée par les autorités nationales ».

3) L'annexe du présent règlement est ajoutée et constitue l'annexe IV.

Article 2

Le présent règlement entre en vigueur le jour de sa publication au Journal officiel des Communautés européennes.

Il est applicable à partir du 1er mars 1991.

Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directement applicable dans tout État membre.

Fait à Bruxelles, le 21 août 1990.

Par la Commission

Ray MAC SHARRY

Membre de la Commission

(1) JO no L 148 du 28. 6. 1968, p. 13.

(2) JO no L 378 du 27. 12. 1989, p. 1.

(3) JO no L 199 du 7. 8. 1979, p. 1.

(4) JO no L 296 du 29. 10. 1988, p. 50.

(5) JO no L 169 du 18. 7. 1968, p. 4.

(6) JO no L 118 du 29. 4. 1989, p. 7.

ANNEXE

« ANNEXE IV

LA DÉTERMINATION DE LACTOSÉRUM PRÉSURE SEC DANS LE LAIT ÉCRÉMÉ EN POUDRE ET LES MÉLANGES VISÉS AU RÈGLEMENT (CEE) No 1725/79

1.2 // 1. // Objectif: Détection d'addition de lactosérum présure sec dans les produits suivants: // // a) lait écrémé en poudre défini à l'article 1er du règlement (CEE) no 986/68 et // // b) les mélanges définis à l'article 1er paragraphe 3 du règlement (CEE) no 1725/79. // 2. // Références: Norme internationale ISO 707. // // Lait et produits laitiers: méthodes d'échantillonnage conformément aux indications figurant à l'annexe I point 2 lettre c) du règlement (CEE) no 625/78. // 3. // Définition // // La teneur de lactosérum présure sec est définie comme le pourcentage (en masse) déterminé par la procédure décrite. // 4. // Principe // // Détermination de la teneur en glycomacropeptide A conformément à l'annexe V du règlement (CEE) no 625/78. Les échantillons donnant des résultats positifs sont analysés pour détecter les glycomacropeptides A (GMPA) par chromatographie en phase liquide à haute performance en phase inverse (methode CLHP). L'évaluation du résultat est obtenue par référence aux échantillons étalons constitués de lait écrémé en poudre avec et sans addition de lactosérum en poudre. Des résultats supérieurs à 1 % (m/m) prouvent la présence de lactosérum présure sec. // 5. // Réactifs // // Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau ayant une pureté au moins équivalente. L'acétronitrile doit être de qualité spectroscopique ou HPLC. // // Les réactifs utilisés pour la procédure décrite dans le règlement (CEE) no 625/78 sont décrits à l'annexe V du présent règlement. // // Réactifs pour la procédure CLHP en phase inversée. // 5.1. // Solution d'acide trichloracétique // // Dissoudre 240 g d'acide trichloracétique (CCI3CCOOH) dans de l'eau et compléter à 1 000 ml. // 5.2. // Éluants A et B // // Éluant A: introduire, dans une fiole jaugée de 1 000 ml, 150 ml d'acétonitrile (CH3CN), 20 ml d'isopropanol (CH3CHOHCH3) et 1,00 ml d'acide trifluroacétique (TFA, CF3COOH). Diluer à 1 000 ml avec de l'eau. Éluant B: introduire, dans une fiole jaugée de 1 000 ml, 550 ml d'acétonitril, 20 ml d'isopropanol et 1,00 ml de TFA. Diluer à 1 000 ml avec de l'eau. Filtrer la solution éluante, avant l'utilisation, sur une membrane filtrante de 0,45 micromètre (m m) de diamètre de pore. // 5.3. // Conservation de la colonne // // Après les analyses, la colonne est rincée avec l'éluant B (à l'aide d'un gradient) puis rincée avec de l'acétonitrile (à l'aide d'un gradient pendant 30 minutes). La colonne est conservée dans l'acétonitrile. // 5.4. // Échantillons témoins // 5.4.1. // Lait écrémé en poudre répondant aux exigences du règlement (CEE) no 625/78, soit (0). // 5.4.2. // Le même lait écrémé en poudre adultéré à 5 % (m/m) par du lactosérum en poudre de type présure de composition standard, soit (5). // 5.4.3. // Le même lait écrémé en poudre adultéré à 50 % (m/m) par du lactosérum en poudre de type présure de composition standard, soit (50) (*) // 6. // Appareillage // // L'appareillage requis pour le mode opératoire décrit dans le règlement (CEE) no 625/78 est ceux des poudres NIZO peuvent également être utilisées.

// 6.1. // Balance analytique // 6.2. // Centrifugeuse pouvant atteindre une force centrifuge de 2 200 g et munie de tubes à centrifuger bouchés, d'une capacité d'environ 50 ml. // 6.3. // Agitateur mécanique pouvant agiter à 50 °C. // 6.4. // Agitateur magnétique. // 6.5. // Entonnoirs en verre, d'environ 7 cm de diamètre. // 6.6. // Papiers filtres, filtration moyenne, d'environ 12,5 cm de diamètre. // 6.7. // Dispositif de filtration en verre muni de membrane filtrante de 0,45 micromètre de diamètre de pore. // 6.8. // Pipettes graduées, permettant de délivrer 10 ml (ISO 648, classe A ou ISO/R 835) ou un système pouvant délivrer 10,0 ml en deux minutes. // 6.9. // Bain d'eau thermostaté réglé à 25 ± 0,5 °C. // 6.10 // Équipement CLHP comprenant: // 6.10.1. // pompe à gradient binaire, // 6.10.2. // injecteur, manuel ou automatique, de 100 microlitres (ml) de capacité, // 6.10.3. // une colonne Dupont Protein Plus (longueur: 25 cm, diamètre intérieur: 0,46 cm) ou une colonne équivalente en phase inverse, à base de silice, à larges pores, // 6.10.4. // four à colonne thermostatée réglé à 35 ± 1 °C, // 6.10.5. // détecteur UV à longueur d'onde variable, permettant d'effectuer des mesures à 210 nm (si nécessaire, une longueur d'onde supérieure pouvant atteindre 220 nm peut être utilisée) à une sensibilité de 0,02 AA, // 6.10.6. // intégrateur pouvant intégrer de vallée à vallée. // // Note: // // Il est possible de travailler avec des colonnes maintenues à température ambiante à condition que cette température ambiante ne fluctue pas plus de 1 °C; sinon, on constate des variations assez grandes dans le temps de rétention des GMPA. // 7. // Échantillonnage // 7.1. // Norme internationale ISO 707 - Lait et produits laitiers - Méthodes d'échantillonnage conformément aux indications figurant au point 2 lettre c) de l'annexe I du règlement (CEE) no 625/78. // 7.2. // Conserver l'échantillon dans des conditions telles qu'aucune détérioration ou modification de composition ne puisse intervenir. // 8. // Mode opératoire // 8.1. // Préparation de l'échantillon pour essai // // Transvaser le lait en poudre dans un récipient de capacité environ double du volume de la poudre, muni d'un couvercle étanche à l'air. Fermer le récipient immédiatement. Bien mélanger le lait en poudre par retournements successifs du récipient. // 8.2. // Prise d'essai // // Peser 2,00 ± 0,001 g d'échantillon pour essai dans un tube à centrifuger (voir point 6.2) ou dans un ballon bouché (50 ml). // 8.3. // Élimination des matières grasses et des protéines // 8.3.1. // Ajouter 20,0 g d'eau chaude (50 °C) à la prise d'essai. Dissoudre la poudre en agitant pendant cinq minutes à l'aide de l'agitateur ou pendant trente minutes, dans le cas de babeurre acide, à l'aide de l'agitateur mécanique (voir point 6.3). Placer le tube dans le bain d'eau (voir point 6.9) et ramener la température du tube à 25 °C. // 8.3.2. // Ajouter, en deux minutes, 10,0 ml de la solution d'acide trichloracétique à 25 °C (voir point 5.1), tout en agitant vigoureusement à l'aide de l'agitateur magnétique (voir point 6.4). Placer le tube dans le bain d'eau (voir point 6.9) et l'y maintenir 60 minutes. // 8.3.3. // Centrifuger (voir point 6.2) 2 200 g pendant dix minutes, ou filtrer sur papier (voir point 6.6), rejeter les cinq premiers ml de filtrat. // 8.4. // Détermination chromatographique // 8.4.1. // Procéder à l'analyse CLHP telle qu'elle est décrite à l'annexe V du règlement (CEE) no 625/78. Si le résultat est négatif, l'échantillon analysé ne contient pas de lactosérum présure en quantités décelables. Si le résultat est positif, il faut appliquer la méthode CLHP en phase inverse décrite ci-après. La présence de babeurre acide en poudre peut donner lieu à de faux résultats positifs. La méthode CLHP en phase inverse exclut cette possibilité. // 8.4.2. // Avant de mettre en oeuvre l'analyse CLHP en phase inverse, il faut optimiser les conditions de gradient. Un temps de rétention de 26 minutes ± 2 minutes pour les GMPA est idéal pour les systèmes à gradient ayant un volume mort d'environ 6 ml (volume du point où les solvants se retrouvent au volume de la boucle de l'injecteur compris). Dans le cas de systèmes à gradient ayant un volume mort inférieur (par exemple 2 ml) on devrait appliquer comme temps de rétention optimal une durée de 22 minutes. // // Préparer les échantillons étalons (voir point 5.4) sans et avec 50 % de lactosérum présure. // // Injecter 100 ml de surnageant ou de filtrat (voir point 8.3.3) dans l'appareil CLHP en utilisant les conditions du gradient de référence indiquées au tableau 1. // // Tableau 1: Conditions du gradient de référence pour l'optimalisation de la chromatographie. 1.2.3.4.5 // // // // // // Temps (minutes) // Débit (ml/minute) // % A // % B // Courbe // // // // // // Init // 1,0 // 90 // 10 // * // 27 // 1,0 // 60 // 40 // lin // 32 // 1,0 // 10 // 90 // lin // 37 // 1,0 // 10 // 90 // lin // 42 // 1,0 // 90 // 10 // lin // // // // // 1.2 // // La comparaison des deux chromatogrammes doit faire apparaître le pic de GMPA. // // À l'aide de la formule donnée ci-après, la composition du solvant initial à utiliser pour le gradient normal (voir point 8.4.3) peut être calculée comme suit: // // % B = 10 - 2,5 + (13,5 +(RTgmpA - 26)/6)*30/27 // // % B = 7,5 + (13,5 + (RTgmpA - 26)/6)*1,11 // // dans laquelle: 1.2.3 // // RTgmpA = // temps de rétention du GMPa dans le gradient de référence // // 10 = // le % B initial du gradient de référence // // 2,5 = // % B au point central moins % B au début dans le gradient normal // // 13,5 = // temps à mi-parcours du gradient de référence // // 26 = // temps de rétention nécessaire pour le GMPA // // 6 = // rapport des pentes du gradient de référence et du gradient normal // // 30 = // % B au début moins % B à 27 minutes. Dans le gradient de référence // // 27 = // temps de parcours du gradient de référence. 1.2 // 8.4.3. // Injection des échantillons pour essai // // Injecter 100 ml mesurés exactement de surnageant ou de filtrat (voir point 8.3.3) dans l'appareil CLHP sous un débit de 1,0 ml de solution éluante (voir point 5.2) par minute. // // La composition de l'éluant au début de l'analyse découle du point 8.4.2 Elle est normalement proche de A: B = 76 : 24 (voir point 5.2). Immédiatement après l'injection on démarre le gradient linéaire pour arriver après 27 minutes à un pourcentage B supérieur de 5 %., Puis, on démarre le gradient linéaire qui amène la composition de l'éluant B à 90 % en cinq minutes. Cette composition est maintenue pendant cinq minutes. Puis, toujours à l'aide d'un gradient linéaire, revenir à la composition initiale en 5 minutes. Selon le volume interne du système de pompage, l'injection suivante peut être faite 15 minutes après avoir atteint les conditions initiales. // // Remarques // // 1. Le temps de rétention des glycomacropeptides devrait être de 26 minutes ± 2 minutes, ce qui peut être obtenu en variant les conditions initiales et les conditions finales du premier gradient. Cependant, la différence dans le % B entre les conditions initiales et les conditions finales du premier gradient doit rester de 5 % B. // // 2. Les éluants doivent être dégazés suffisamment et doivent également être conservés dégazés. Cela est indispensable au bon fonctionnement du système de pompage du gradient. L'écart type concernant le temps de rétention du pic du GMP doit être inférieur à 0,1 minute (n = 10). // // 3. Tous les cinq échantillons, il y a lieu d'injecter et d'utiliser l'échantillon de référence (5) pour calculer un nouveau coefficient de réponse R (voir 9.1.1).

Absorbance (220 nm)

» décrit à l'annexe V du présent règlement.

(*) Le lactosérum en poudre de type présure de composition standard ainsi que la poudre de lait écrémé adultéré peuvent être obtenus auprès de NIZO, Kernhemseweg 2, PO Box 20, NL-6710 BA. Cependant, les poudres donnant des résultats équivalents à

9.4 .

Interprétation

9.4.1 .

Conclure à la présence de lactosérum si le résultat obtenu au point 9.2 est supérieur à 1 % m/m et si le temps de rétention du pic du GMP diffère de moins de 0,2 minute de celui de l'échantillon standard ( 5 ). La limite de 1 % est fixée conformément aux dispositions des points 9.2 et 9.4.1 de l'annexe V du règlement ( CEE ) 625/78 .

Absorbance ( 220 nm )

" règlement .

(*) Le lactosérum en poudre de type présure de composition standard ainsi que la poudre de lait écrémé adultéré peuvent être obtenus auprès de NIZO, Kernhemseweg 2, PO Box 20, NL-6710 BA . Cependant, les poudres donnant des résultats équivalents à