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DIRECTIVE DE LA COMMISSION

du 7 juin 1984

modifiant les annexes de la directive 77/96/CEE du Conseil relative à la recherche de trichines lors des importations, en provenance des pays tiers, de viandes fraîches provenant d'animaux domestiques de l'espèce porcine

(84/319/CEE)

LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS

EUROPÉENNES,

vu le traité instituant la Communauté économique européenne,

vu la directive 77/96/CEE du Conseil, du 21 décembre 1976, relative à la recherche de trichines lors des importations, en provenance des pays tiers, des viandes fraîches provenant d'animaux domestiques de l'espèce porcine (1), modifié en dernier lieu par la directive 83/91/CEE (2), et notamment son article 8,

considérant que des études récemment effectuées ont permis la mise au point de certaines méthodes de recherche de trichines dans les viandes porcines; que ces méthodes offrent des garanties sanitaires équivalentes à celles offertes par les méthodes existantes; qu'il convient dès lors de compléter l'annexe I de la directive 77/96/CEE;

considérant que, en vue de faciliter l'exécution de la recherche de trichines, il importe de permettre aux pays tiers et aux États membres de choisir parmi les méthodes de recherche prévues;

considérant que certaines adaptations d'ordre technique doivent être introduites dans les méthodes de recherche des trichines actuellement appliquées et en ce qui concerne les conditions auxquelles doivent répondre les laboratoires de dépistage des trichines;

considérant que les mesures prévues par la présente directive sont conforme à l'avis du comité vétérinaire permanent,

A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:

Article premier

La directive 77/96/CEE est modifiée conformément à l'annexe.

Article 2

Les États membres mettent en vigueur les dispositions législatives, réglementaires et administratives nécessaires pour se conformer à la présente directive au plus tard le 1er janvier 1985. Ils en informent immédiatement la Commission.

Article 3

Les États membres sont destinataires de la présente directive.

Fait à Bruxelles, le 7 juin 1984.

Par la Commission

Poul DALSAGER

Membre de la Commission

(1) JO no L 26 du 31. 1. 1977, p. 67.

(2) JO no L 59 du 5. 3. 1983, p. 34.

ANNEXE

A. L'annexe I est modifiée comme suit.

1. Au point II lettre a):

- le dixième tiret est remplacé par le tiret suivant:

« - Stéréomicroscope (grossissement 15 à 40 fois) disposant d'un éclairage approprié. »

- le dernier tiret est remplacé par le tiret suivant:

« - Liquide de digestion composé comme suit: 10 g de pepsine [80 U/g FIP (Fédération internationale de pharmacie)], 5 ml de HCl (37 % au moins), porter à un litre avec de l'eau courante. »

2. Le texte au point III est remplacé par le texte suivant:

« III. MÉTHODE DE LA DIGESTION ARTIFICIELLE D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS

a) Appareillage et réactifs

- Un couteau et des pinces pour le prélèvement des échantillons.

- Un hache-viande dont les trous devraient avoir un diamètre compris entre 2 et 3 mm.

- Un Erlenmeyer de 3 l muni d'un bouchon de caoutchouc ou d'ouate.

- Un entonnoir conique de séparation d'une capacité de 2 000 ml.

- Un support ordinaire à pied en A de 28 cm de longueur, muni d'une tige de 80 cm.

- Un anneau de 10 à 11 cm pouvant être fixé sur le support.

- Une pince pourvue d'une machoire plate (23/40 mm) qui peut être attachée au support à l'aide d'un manchon double.

- Un tamis (finesse de maille: 177 ) d'un diamètre extérieur de 11 cm pourvu d'un treillis en laiton, ou en acier inoxydable.

- Un entonnoir d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm.

- Des éprouvettes graduées de 100 ml.

- Un stéréomicroscope (grossissement 15 à 40 fois) disposant d'un éclairage approprié, ou un trichinoscope pourvu d'une table horizontale pour le compresseur disposant d'un éclairage approprié.

- En cas d'utilisation du trichinoscope: une cuvette pour le comptage des larves qui peut être décrite comme suit:

une cuvette formée de plaques acryliques d'une épaisseur de 3 mm et ayant les caractéristiques suivantes:

i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés;

ii) plaques latérales: 230 × 20 mm;

iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.

Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques latérales de façon à former une cuvette munie de 2 petites poignées aux deux extrémités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de 7 à 9 mm par rapport à la base du cadre formé par les plaques latérales et frontales. Les plaques doivent être fixées à l'aide d'une colle appropriée au matériau.

- En cas d'utilisation du stéréomicroscope, une série de boîtes de Pétri d'un diamètre de 9 cm dont le fond a été divisé en carrés d'examen de 10 × 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.

- Plusieurs poubelles de 10 l à employer lors de la décontamination par un traitement tel que le formol de l'appareillage, et pour le suc digestif restant en cas de résultat positif.

- De l'acide chlorhydrique concentré (37 %).

- Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),

correspondant à 1:12 500 BP (British Pharmacorpoea),

correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).

- Un nombre de plateaux qui puissent contenir 50 échantillons d'environ 2 g chacun.

- Une balance de précision de 0,1 g. b) Prélèvement des échantillons

1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur la musculature de la langue ou les muscles masticateurs, ou encore sur la musculature abdominale.

2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.

c) Méthode

1. i) Groupes complets d'échantillons (100 à la fois)

Un échantillon d'approximativement 1 g est prélevé sur chacun des 100 échantillons individuels provenant des porcs. L'échantillon collectif est passé une fois au hache-viande.

La viande hachée est placée dans l'Erlenmeyer de 3 l, en même temps que 7 g de pepsine, et recouverte de 2 l d'eau de robinet chauffée à une température approximative de 40 à 41 °C, et de 25 ml d'acide chlorhydrique concentré. Agiter le mélange pour dissoudre la pepsine.

Le pH de la solution est alors d'environ 1,5 à 2.

- Pour la digestion, l'Erlenmeyer est placé dans une étuve à 40-41 °C pendant 4 h environ. Pendant ce temps, il est régulièrement agité au moins deux fois par heure.

- La solution digérée est filtrée à l'aide du tamis à travers l'entonnoir conique de séparation de 2 l et laissée au repos sur le support pendant au moins une heure.

- Un volume total d'approximativement 45 ml est soutiré dans une éprouvette graduée et réparti dans trois boîtes de Pétri, dont le fond est divisé en carrés, à raison de 15 ml par boîte.

- Chaque boîte de Pétri est minutieusement examinée au stéréomicroscope afin de déceler les larves.

- En cas d'utilisation de cuvettes pour le comptage des larves, les 45 ml sont répartis dans deux cuvettes et examinés au trichinoscope.

Les larves apparaissent dans le dépôt comme des organismes identifiables et, si l'eau est tiède, on observe fréquemment les enroulements et les déroulements de la spirale.

- Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.

Si les liquides de digestion sont insuffisamment transparents ou s'ils ne sont pas examinés dans un délai de 30 mn suivant leur préparation, ils doivent être éclaircis comme suit: verser l'échantillon final de 45 ml dans une éprouvette graduée et laisser sédimenter pendant 10 mn. À l'issue de ce délai, enlever 30 ml du liquide surnageant par aspiration et ajouter aux 15 ml restants de l'eau du robinet jusqu'à obtenir un volume total de 45 ml. Après une nouvelle période de repos de 10 mn, enlever 30 ml du liquide surnageant par aspiration, verser les 15 ml restants dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour le comptage des larves, en vue de l'examen. Laver l'éprouvette graduée avec 10 ml d'eau du robinet; ajouter le liquide obtenu à l'échantillon dans la boîte de Pétri ou dans la cuvette pour le comptage des larves et examiner.

ii) Groupes de moins de 100 échantillons

Un maximum de 15 échantillons individuels peuvent être ajoutés à un groupe complet de 100 échantillons pour être examinés en même temps que ces derniers. Si le nombre d'échantillons à examiner est supérieur à 15 et inférieur à 100, le liquide de digestion doit être réduit proportionnellement. 2. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon, des échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs, des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-avant. »

3. Les points IV, V, VI suivants sont ajoutés:

« IV. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS AVEC ASSISTANCE MÉCANIQUE / TECHNIQUE DE LA SÉDIMENTATION

a) Appareillage et réactifs

- Un couteau ou des ciseaux pour découper les échantillons.

- Des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des échantillons de viande d'environ 2 g.

- Un Stomacher Lab-blender 3500, Thermo model.

- Des sacs en plastique adaptés au Stomacher Lab-blender.

- Des ampoules à décantation coniques d'une capacité de 2 l munies de préférence de robinets de sécurité en Teflon.

- Des supports avec anneaux et fixations.

- Des tamis, finesse de maille 177 , d'un diamètre extérieur de 11 cm, pourvus d'un treillis en acier inoxydable.

- Des entonnoirs d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm destinés à recevoir les tamis.

- Des éprouvettes graduées de 100 ml.

- Un doseur de 25 ml.

- Des béchers d'une capacité de 3 l.

- Une cuillère ou une tige en verre pour agiter le liquide de digestion dans le bécher.

- Une seringue en plastique et un tube d'aspiration.

- Une cuillère graduée de 6 g.

- Un thermomètre d'une précision de ± 0,5 °C allant de 1 à 100 °C.

- Un vibrateur, par exemple un rasoir électrique sans tête.

- Un relais s'allumant et s'éteignant toutes les minutes.

- Un trichinoscope pourvu d'une table horizontale ou un stéréomicroscope disposant d'un éclairage approprié.

- Une cuvette pour le comptage des larves (en cas d'utilisation d'un trichinoscope).

La cuvette doit être formée de plaques acryliques d'une épaisseur de 3 mm et doit avoir les caractéristiques suivantes:

i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés;

ii) plaques latérales: 230 × 20 mm;

iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.

Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques latérales de façon à former deux petites poignées aux deux extrémités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de 7 à 9 mm par rapport à la base du cadre formé par les plaques latérales et frontales. Fixer les plaques à l'aide d'une colle appropriée au matériau.

- En cas d'utilisation du stéréomicroscope, un certain nombre de boîtes de Pétri d'un diamètre de 9 cm, dont le fond a été divisé en carrés de 10 × 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.

- Solution d'acide chlorhydrique à 17,5 %.

- Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),

correspondant à 1:12 500 BP (British Pharmacopoea),

correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).

- Plusieurs poubelles de 10 l à employer lors de la décontamination par un traitement tel que le formol, de l'appareillage et pour le suc digestif restant en cas de résultat positif.

- Une balance d'une précision de 0,1 g. b) Prélèvement des échantillons

1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur les muscles masticateurs ou encore sur la musculature abdominale.

2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.

c) Méthode

1. Procédé de digestion

i) Groupes complets d'échantillons (100 à la fois)

- Garnir le Stomacher Lab-blender 3500 d'un double sachet en plastique et régler la température à 40-41 °C.

- Verser un litre et demi d'eau chauffée à 32-35 °C dans le sachet intérieur et porter à 40-41 °C.

- Transférer dans le sachet 25 ml de la solution d'acide chlorhydrique à 17,5 %.

- Ajouter ensuite 100 échantillons d'1 g environ chacun (à 25-30 °C) prélevés sur chacun des échantillons individuels selon le procédé visé à la lettre b).

- Ajouter enfin 6 g de pepsine. Respecter scrupuleusement l'ordre des opérations pour éviter la décomposition de la pepsine.

- Broyer dans le Stomacher pendant 25 mn.

- Enlever le sachet en plastique du Stomacher, filtrer le liquide de digestion à l'aide du tamis et laisser couler dans un bécher de 3 l.

- Laver le sachet en plastique avec 100 ml d'eau environ qui sont ensuite utilisés pour rincer le tamis et ajoutés au filtrat contenu dans le bécher.

Un maximum de 15 échantillons individuels peuvent être ajoutés à un groupe complet de 100 échantillons pour être examinés en même temps que ces derniers.

ii) Groupes de moins de 100 échantillons

- Garnir le Stomacher Lab-blender 3500 d'un double sachet en plastique et régler la température à 40-41 °C.

- Préparer un liquide de digestion en mélangeant environ un litre et demi d'eau et 25 ml d'acide chlorhydrique à 17,5 %. Ajouter 6 g de pepsine et mélanger le tout à une température de 40-41 °C. Respecter scrupuleusement l'ordre des opérations pour éviter la décomposition de la pepsine.

- Déterminer un volume de liquide de digestion correspondant à 15 ml par g d'échantillon (ainsi, pour 30 échantillons, il faudra prélever 30 × 15 ml = 450 ml) et le transférer dans le sachet plastique intérieur en même temps que les échantillons de viande d'environ 1 g (à 25-30 °C) prélevés sur chacun des échantillons individuels selon le procédé visé à la lettre b).

- Verser de l'eau à environ 41 °C dans le sachet extérieur jusqu'à obtenir un volume total dans les deux sachets de un litre et demi.

- Broyer dans le Stomacher pendant 25 mn.

- Enlever le sachet en plastique du Stomacher, filtrer le liquide de digestion à l'aide du tamis et laisser couler dans un bécher de 3 l.

- Laver le sachet en plastique avec 100 ml d'eau environ qui sont ensuite utilisés pour rincer le tamis et ajoutés au filtrat contenu dans le bécher.

2. Isolement des larves par sédimentation

- Ajouter au liquide de digestion 300-400 g de glace en paillettes ou de glace pilée pour obtenir un volume d'environ 2 l. Agiter jusqu'à ce que la glace soit fondue. Dans le cas de groupes plus petits [voir sous ii)], la quantité de glace doit être réduite en conséquence.

- Transférer le liquide de digestion refroidi dans une ampoule à décantation de 2 l pourvu d'un vibrateur fixé par une pince supplémentaire. - Pour la sédimentation, laisser le liquide dans l'ampoule à décentation pendant 30 mn en faisant alterner une minute de vibration et une minute d'arrêt.

- Après 30 mn, introduire rapidement 60 ml de sédiment dans une éprouvette graduée de 100 ml. (Après utilisation, rincer l'entonnoir avec une solution détergente).

- Laisser reposer l'échantillon de 60 ml au moins, enlever le liquide surnageant par aspiration jusqu'à laisser dans l'éprouvette un volume de 15 ml qui sera examiné pour rechercher la présence des larves.

- Pour l'aspiration, utiliser une seringue en plastique à jeter, pourvue d'un tube en plastique.

La longueur de celui-ci devrait être telle que 15 ml de liquide restent dans l'éprouvette graduée lorsque la collerette de la seringue se trouve au niveau du bord du cylindre.

- Introduire les 15 ml restants dans une cuvette pour le comptage des larves ou dans 2 boîtes de Pétri et les examiner au trichinoscope ou au stéréomicroscope.

- Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.

Si les liquides de digestion sont insuffisamment transparents ou s'ils ne sont pas examinés dans un délai de 30 mn suivant leur préparation, ils doivent être éclaircis comme suit: verser l'échantillon final de 60 ml dans une éprouvette graduée et laisser sédimenter pendant 10 mn. À l'issue de ce délai, enlever 45 ml du liquide surnageant par aspiration et ajouter aux 15 ml restants de l'eau du robinet jusqu'à obtenir un volume total de 45 ml. Après une nouvelle période de repos de 10 mn, enlever 30 ml du liquide surnageant par aspiration, verser les 15 ml restants dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour le comptage des larves en vue de l'examen. Laver l'éprouvette graduée avec 10 ml d'eau du robinet; ajouter le liquide obtenu à l'échantillon dans la boîte de Pétri ou dans la cuvette pour le comptage des larves et examiner.

3. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon, des échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs, des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-avant.

V. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS AVEC ASSISTANCE MÉCANIQUE / TECHNIQUE DE L'ISOLEMENT PAR FILTRATION

a) Appareillage et réactifs

Les mêmes que ceux de la lettre a) de la méthode IV plus:

- Un entonnoir Gelman d'un litre avec support pour filtre (diamètre du support: 45 mm).

- Des disques filtrants composés de:

un treillis rond en acier inoxydable, finesse de la maille 35 , diamètre du disque: 45 mm;

deux anneaux en caoutchouc d'une épaisseur de 1 mm; diamètre extérieur: 45 mm, diamètre intérieur: 38 mm.

Le treillis doit être placé entre les deux anneaux et fixé à l'aide d'une colle à deux composants adaptée aux deux matériaux.

- Un Erlenmeyer de 3 l muni d'un tube latéral pour aspiration.

- Une trompe à eau.

- Des sachets en plastique d'une capacité d'au moins 80 ml.

- Un soude-sac.

- Rennilase, 1:150 000 unités Soxlet par g.

b) Prélèvement des échantillons

Voir lettre b) de la méthode IV. c) Méthode

1. Procédé de digestion

i) Groupes complets d'échantillons (100 à la fois)

Voir lettre c) point 1 sous i) du titre IV.

ii) Groupes de moins de 100 échantillons

Voir lettre c) point 1 sous ii) du titre IV.

2. Isolement des larves par filtration

- Ajouter au liquide de digestion 300-400 g de glace en paillettes ou de glace pilée pour obtenir un volume d'environ 2 l. Dans le cas de groupes plus petits, la quantité de glace doit être réduite en conséquence.

- Agiter le liquide de digestion jusqu'à ce que la glace soit fondue. Laisser reposer le liquide de digestion refroidi pendant 3 mm au moins pour que les larves puissent s'enrouler.

- Monter l'entonnoir Gelman muni d'un support pour filtre, dans lequel se trouve un disque filtrant, sur un Erlenmeyer relié à une trompe à eau.

- Introduire le liquide de digestion dans l'entonnoir Gelman et filtrer. Vers la fin, le passage du liquide à travers le filtre peut être accéléré en procédant à une aspiration à l'aide de la trompe à eau. Terminer l'aspiration juste avant que le filtre ne sèche, c'est-à-dire lorsqu'il reste 2 à 5 ml de liquide dans l'entonnoir.

- Après filtration de tout le liquide de digestion, enlever le disque filtrant et le placer dans un sachet en plastique de 80 ml en ajoutant 15 à 20 ml de solution de rennilase. Pour obtenir la solution de rennilase, on introduit 2 g de rennilase dans 100 ml d'eau du robinet.

- Pratiquer une double soudure du sachet en plastique et le placer dans le Stomacher entre le sachet intérieur et le sachet extérieur.

- Broyer dans le Stomacher pendant 3 mn, par exemple, pendant que l'appareil est utilisé pour l'analyse d'un groupe complet ou incomplet d'échantillons.

- Après 3 mn, enlever du Stomacher le sachet en plastique contenant le disque filtrant et la solution de rennilase et l'ouvrir à l'aide de ciseaux. Introduire le liquide dans une cuvette pour le comptage des larves ou une boîte de Pétri. Laver le sachet avec 5 à 10 ml d'eau qui sont ensuite introduits dans la cuvette en vue de la trichinoscopie ou dans une boîte de Pétri pour examen au stéréomicroscope.

- Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.

Note

Ne jamais utiliser des disques filtrants qui ne sont pas parfaitement propres. Ne jamais sécher des disques filtrants s'ils ne sont pas propres.

Pour nettoyer les disques, il faut les laisser dans une solution de rennilase pendant la nuit. Avant d'être utilisés, ils doivent être lavés dans le Stomacher à l'aide d'une solution de rennilase.

3. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc conformément aux indications visées sous b) ci-dessus. Les échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et examinés selon la méthode décrite ci-dessus. De cette façon, des échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs, des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-avant.

VI. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS UTILISANT UN AGITATEUR MAGNÉTIQUE

a) Appareillage et réactifs

- Un couteau et des pinces pour le prélèvement des échantillons.

- Des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des échantillons de viande d'environ 2 g.

- Une moulinette.

- Un agitateur magnétique pourvu d'une plaque chauffante à température contrôlée et un barreau magnétique (recouvert de Teflon) d'environ 5 cm. - Des ampoules à décantation coniques d'une capacité de 2 l.

- Des supports avec anneaux et fixations.

- Des tamis, finesse de la maille 177 , d'un diamètre extérieur de 11 cm, pourvus d'un treillis en acier inoxydable.

- Des entonnoirs d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm destinés à recevoir le tamis.

- Un bécher de 3 l.

- Des éprouvettes graduées d'une capacité approximative de 50 ml ou des tubes de centrifugation.

- Un trichinoscope pourvu d'une table horizontale ou un stéréomicroscope disposant d'un éclairage approprié.

- Une cuvette pour le comptage des larves (en cas d'utilisation d'un trichinoscope).

La cuvette doit être formée de plaques acryliques d'une épaisseur de 3 mm et doit avoir les caractéristiques suivantes:

i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés,

ii) plaques latérales: 230 × 20 mm,

iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.

Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques latérales de façon à former deux petites poignées aux deux extrémités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de 7 à 9 mm par rapport à la base du cadre formé par les plaques latérales et frontales.

Fixer les plaques à l'aide d'une colle appropriée au matériau.

- Plusieurs boîtes de Pétri (en cas d'utilisation d'un stéréomicroscope dont le fond a été divisé en carrés de 10 × 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.

- Une feuille d'aluminium.

- Acide chlorhydrique à 25 %.

- Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),

correspondant à 1:12 500 BP (British Pharmacopoea),

correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).

- Eau du robinet chauffée à 46-48 ° C.

- Plusieurs poubelles de 10 1 à employer lors de la décontamination par un traitement tel que le formol de l'appareillage, et pour le suc digestif restant en cas de résultat positif.

- Une balance d'une précision de 0,1 g.

b) Prélèvement des échantillons

1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur les muscles masticateurs ou encore sur la musculature abdominale.

2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximativement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.

c) Méthode

1. i) Groupes complets d'échantillons (100 à la fois)

- Broyer dans la moulinette 100 échantillons d'environ 1 g, prélevés sur chaque échantillon individuel conformément aux indications de la lettre b). Faire fonctionner l'appareil trois ou quatre fois pendant une seconde.

- Transférer la viande broyée dans un bécher de 3 l et la saupoudrer de 10 g de pepsine. Introduire dans le bécher 2 l d'eau du robinet chauffée à 46-48 ° C et ajouter 16 ml d'acide chlorhydrique.

- Tremper plusieurs fois le dispositif de broyage de la moulinette dans le liquide de digestion se trouvant dans le bécher pour en ôter les substances y adhérant encore.

- Placer le barreau magnétique dans le bécher et couvrir celui-ci d'une feuille d'aluminium. - Poser le bécher sur la plaque préchauffée de l'agitateur magnétique et mettre en route l'agitation. Avant de commencer le processus d'agitation, l'agitateur magnétique doit être réglé de telle sorte qu'une température constante de 44-46 °C puisse être maintenue pendant le fonctionnement. Au cours du processus d'agitation, le liquide de digestion doit tourner à une vitesse suffisamment élevée pour former un profond tourbillon central sans provoquer d'éclaboussures.

- Agiter le liquide de digestion pendant 30 mn, arrêter l'appareil; filtrer le liquide de digestion au travers du tamis placé dans un entonnoir et recueillir le filtrat dans une ampoule à décantation.

- Laisser le liquide de digestion dans l'ampoule à décantation pendant 30 mn.

- Après 30 mn, transférer rapidement un échantillon de 40 ml du liquide de digestion dans l'éprouvette graduée ou le tube de centrifugation.

- Laisser reposer l'échantillon de 40 ml pendant 10 mn et aspirer ensuite 30 ml de liquide surnageant laissant ainsi un volume de 10 ml.

- L'échantillon de 10 ml de sédiment restant est versé dans une cuvette pour le comptage des larves ou dans une boîte de Pétri.

- Rincer l'éprouvette graduée ou le tube de centrifugation avec environ 10 ml d'eau du robinet qui seront ajoutés à l'échantillon dans la cuvette de comptage des larves ou dans la boîte de Pétri. Procéder ensuite à l'observation au trichinoscope ou à l'examen au stéréomicroscope, selon le cas.

- Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.

Si les liquides de digestion ne sont pas examinés dans un délai de 30 mn suivant leur préparation, ils doivent être éclaircis comme suit: verser l'échantillon final d'environ 40 ml dans une éprouvette graduée et laisser sédimenter pendant 10 mn. À l'issue de ce délai, enlever 30 ml du liquide surnageant afin d'obtenir un volume de 10 ml. Ce volume est porté à 40 ml avec de l'eau du robinet. Après une nouvelle période de repos de 10 mn, enlever 30 ml du liquide surnageant, par aspiration, pour obtenir un volume de 10 ml à examiner dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour le comptage des larves. Laver l'éprouvette graduée avec 10 ml d'eau du robinet et ajouter le liquide obtenu à l'échantillon dans la boîte de Pétri ou dans la cuvette pour le comptage des larves, en vue d'un examen.

Si l'examen fait apparaître que le sédiment n'est pas clair, l'échantillon doit être versé dans une éprouvette graduée et son volume doit être porté à 40 ml avec de l'eau du robinet. Ensuite la méthode précitée est appliquée.

ii) Groupes de moins de 100 échantillons

15 échantillons de 1 g chacun peuvent le cas échéant être ajoutés à un groupe de 100 échantillons et examinés en même temps que ces derniers selon la méthode décrite à la lettre c). Plus de 15 échantillons doivent être examinés en tant que groupe complet. Dans le cas de groupes allant jusqu'à 50 échantillons, les liquides de digestion peuvent être réduits à 1 l.

2. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon des échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs, des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-avant. »

B. L'annexe II chapitre Ier paragraphe 1 est modifiée comme suit:

1. La lettre b) est remplacée par le texte suivant:

« b) d'un local d'examen suffisamment équipé, fermant à clé, occultable dans le cas d'utilisation d'un trichinoscope. »

2. La lettre f) est supprimée; les lettres g), h), i), j), k), l), m) et n) deviennent respectivement f), g), h), i), j), k), l) et m). 3. La nouvelle lettre g) est remplacée par le texte suivant:

« g) d'une salle d'eau pour le nettoyage et la désinfection du matériel d'examen (par exemple récipients à échantillons, compresseurs, couteaux et ciseaux) pourvu:

- d'un revêtement de sol imperméable et imputrescible, facile à nettoyer et à désinfecter,

- de murs lisses enduits jusqu'à une hauteur de 2 m au minimum d'un revêtement ou d'une peinture lavable et claire.

Cette disposition n'est pas obligatoire en cas d'application des méthodes visées aux titres II, III, IV, V, VI de l'annexe I à condition que les laboratoires disposent d'un grand évier convenablement raccordé aux canalisations. »